一、ABI7900熒光定量PCR儀是繼7700、5700型熒光定量PCR儀之后，ABI公司推出的高通量實時熒光定量PCR系統(tǒng)。它是兼容96孔板和384孔板的熒光定量PCR儀，也是可選手工進樣和自動進樣的熒光定量PCR儀。7900HT型熒光定量PCR儀可滿足從中通量到高通量實驗的需求。  

二、ABI7900熒光定量PCR儀主要特點:  

（1）高效平臺-7900HT系統(tǒng)是為支持高通量而構(gòu)建的，光學(xué)系統(tǒng)經(jīng)優(yōu)化以適用于384孔板熒光信號的激活和實時檢測。  

（2）結(jié)果可靠-7900HT系統(tǒng)采用了與7700、5700相同的定量原理，利用Ct值（Ct定義為在基線上方產(chǎn)生可檢測到的統(tǒng)計學(xué)上顯著的熒光發(fā)射的這一PCR循環(huán)）和起始拷貝數(shù)的對應(yīng)關(guān)系，通過外標(biāo)準(zhǔn)曲線精確計算未知樣品的起始拷貝數(shù)。  

（3）高度重現(xiàn)性-7900HT系統(tǒng)的熒光檢測發(fā)生在PCR對數(shù)期的起始，因此反應(yīng)管中各組分沒有任何限制反應(yīng)因素，從而確保檢測結(jié)果都是精確并能重復(fù)的。  

（4）先進的熒光檢測技術(shù)-RISM®7900HT熒光定量PCR系統(tǒng)在不降低速度、分辨率的情況下有效提高了產(chǎn)率，這是基于先進的熒光檢測技術(shù)：一束激光掃描并激活384個孔的每一個孔里的熒光染料，熒光信號通過光柵分光，經(jīng)過分離的多色熒光同時到達CCD攝像機，實現(xiàn)多色熒光同時檢測。  

（5）自動進樣裝置-7900HT系統(tǒng)配備有自動化配件可取得高效率。自動化裝置可容納84塊384孔板，機械手臂可按一定順序?qū)⒋郎y樣品板運送至主機內(nèi)，配備的條形碼閱讀器（Barcodereader）可自動識別進入主機的樣品板編號，使你在任何時間可以在樣品行列中插入或替代樣品板。  

（6）多樣的化學(xué)試劑-7900HT型熒光定量PCR儀上可使用的化學(xué)試劑包括TaqMan熒光探針法和SYBRGreen熒光染料法。TaqMan探針法具有高度的靈敏度和特異性，適用于實時定量的多重反應(yīng)或單核苷酸多態(tài)性分析（SNP）。SYBRGreen染料應(yīng)用于目標(biāo)鑒定（篩選測定）或者在只需用少數(shù)幾個反應(yīng)的測定中為理想。  

（7）有效防污染-7900HT系統(tǒng)在PCR全過程中使用專門設(shè)計的和始終密閉的樣品管。在加入樣品和試劑后這些管子便立即封閉并在擴增和檢測過程中保持這種狀態(tài)，這樣就可以大大地減少污染的機會；此外，7900HT系統(tǒng)不存在PCR后處理，有效防止擴增產(chǎn)物對實驗環(huán)境的污染而造成的假陽性。  

（8）多種定量方法-ABIPRISM®7900HT序列檢測系統(tǒng)軟件為基因表達提供一種定量化方法。定量是從一個標(biāo)準(zhǔn)曲線上直接測定目標(biāo)（基因）的量。相對定量方法是通過與標(biāo)定樣品相比較而計算未知樣品的量，不需要標(biāo)準(zhǔn)曲線。  

三、原理介紹：  

1.定量，為了測定未知樣品中的目標(biāo)（基因）的數(shù)量，7900HT系統(tǒng)可用來測定樣品的CT，然后用一條標(biāo)準(zhǔn)曲線來測定起始的拷貝數(shù)。在標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制中，7900HT系統(tǒng)軟件首先用已知的起始拷貝數(shù)的幾種稀釋度計算它們的CT值。接著，軟件使用測得的CT值對應(yīng)于起始拷貝數(shù)的對數(shù)值作圖。至少在五個數(shù)量級范圍中兩者呈線性關(guān)系。  

2.相對定量，對于基因表達研究來說，相對定量是理想的方法。這里不是應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)曲線而是相對于標(biāo)定樣品計算表達水平。用一個內(nèi)源對照來標(biāo)定樣品的量。這一方法與7900HT系統(tǒng)在一個多重反應(yīng)中能同時對目標(biāo)和內(nèi)源對照進行定量測定的能力相結(jié)合，可實現(xiàn)高效、高通量的基因表達研究。  

3.有效的SNP檢測手段，除實時定量測定以外，7900HT系統(tǒng)包括對于已知的單一核苷酸多態(tài)性（SNPS）作大規(guī)模篩選的軟件。在一對等位基因系統(tǒng)中，用對應(yīng)于兩個等位基因的兩個TaqMan探針在同一個試管中做多重PCR反應(yīng)。反應(yīng)終止時所產(chǎn)生的熒光用7900HT系統(tǒng)進行測定，實驗結(jié)果通過分析軟件迅速取得。  

四、儀器規(guī)格和技術(shù)指標(biāo):  

（1）系統(tǒng)組成，7900HT熒光定量PCR儀－384孔或96孔可更換式半導(dǎo)體控溫PCR儀，488nm長壽氬離子激光器，X,Y雙軸同步熒光掃描頭。  

（2）光柵和CCD檢測裝置，自動進樣裝置，DELLGX270電腦，Windows2000操作系統(tǒng)，儀器控制，數(shù)據(jù)采集及結(jié)果分析軟件，PrimerExpress引物探針設(shè)計軟件。  

（3）大產(chǎn)率，實時定量檢測－5000樣品/天（標(biāo)準(zhǔn)模式），96樣品/35分鐘（快速模式），終點SNP分析－30000樣品/2.5小時。  

（4）裝機指標(biāo)，以99.7%的置信度明確區(qū)分濃度差別兩倍（5000和10000拷貝）的樣品的定量結(jié)果試劑和消耗品。  

（5）完備的通用基本試劑盒和消耗品，十二萬種TaqmanGeneExpressionAssays人、大鼠、小鼠基因組基因表達分析試劑盒，二百萬種TaqmanValidatedSNPGenotypingAssays人、大鼠、小鼠基因組SNP檢測試劑盒。  

（6）Taqman低密度表達譜芯片，CustomAssays代客設(shè)計、合成引物探針服務(wù)。